豬多殺性巴氏桿菌(PM)的診斷技術

來源：  發布日期：2011-10-10  發布者：曉天  共閱1165次

豬呼吸道綜合征(PRDC)已成為影響養豬業的重要群發性疾病之一。豬多殺性巴氏桿菌是豬呼吸道綜合癥(PRDC)的重要原發感染菌或繼發原菌。因此，其診斷技術越來越受到世界各國的重視。針對多殺性巴氏桿菌的診斷技術的重要性突顯出來。豬多殺性巴氏桿菌的診斷綜述如下：

一、臨床診斷

多殺性巴氏桿菌是引起多種畜禽巴氏桿菌病的病原體，主要使動物發生出血性敗血病或傳染性肺炎。此菌廣泛分布與世界各地， PRDC的病原可分為原發和繼發病原兩類，正常存在與多種健康動物的口腔和咽部黏膜，當動物處于應激狀態，機體抵抗力低下時，細菌侵入體內，大量繁殖并致病，發生內源性傳染。

（一）流行病學特征 根據流行病學特征多殺性巴氏桿菌病一年四季均可發病，多在春夏呈爆發,且在同種或不同種動物間可互相傳染，蜱和蚤被認為是自然傳播的媒介昆蟲。

臨床表現癥狀表現為，病豬突然發病，死亡率高。多數體溫升高到41.5～42.0℃，食欲減退或廢絕，全身衰弱、臥地不起，煩躁不安，咳嗽氣喘，呼吸困難，心跳加快，頸下咽喉部發熱、紅腫、堅硬，嚴重者向上蔓延及耳根，向后達及胸前，糞便干燥或腹瀉，呈暗綠色，并帶有惡臭等為特征疾病。發病后，迅速死亡，也可能拖延3—5天。視具體情況而定。

（二）病理剖檢 病豬剖檢，可以發現皮下組織可見出血點，主要病變以咽喉部及其周圍結締組織、淋巴結的漿液性出血炎癥和喉頭氣管內充滿淡黃色膠胨樣分泌物為特征性的病變?？梢姷酱罅康哪z胨樣淡黃色纖維素漿液。水腫自頸部延至前肢；全身淋巴結有輕度的腫脹、出血、切面深紅；心包膜有小出血點；肺水腫，呈紅白相間的大理石花紋，肺胸膜表面可見到紅褐色到灰紅色斑點狀病變區，胸腔積液，大多數病變在膈葉，有小指頭到雞蛋大小的局部性化膿灶、出血灶，嚴重者胸膜常有纖維素性附著物，肺泡腔、細支氣管、支氣管腔內有嗜中性粒細胞浸潤，伴有黏膜上皮纖維素性變化、脫落，肺呈大葉性肺炎，間質水腫出血，粘連性纖維素性胸膜炎；脾有出血。

（三）診斷技術

1.實驗室微生物學診斷技術。實驗室微生物學診斷可分為以下三部分。：

（1）顯微鏡檢查。取病豬的滲出液、心血、肝、脾、淋巴結、骨髓等新鮮組織涂片或觸片，以瑞氏染色液或堿性美蘭液染色時，鏡檢可見典型的兩極著色的短桿菌，即菌體兩端染色深，中間淺，無鞭毛，不形成芽孢，有莢膜。既可初步診斷。純培養物進行革蘭氏染色、鏡檢，可見兩端鈍圓的革蘭氏陰性球桿狀或短桿狀菌。

（2）細菌分離、培養與鑒定。分離培養可用病豬肺組織、肝臟、心血等新鮮病料，接種鮮血瓊脂平板、馬丁氏血清瓊脂平板、麥康凱瓊脂平板和血清肉湯培養基，馬丁氏血清瓊脂平板上菌落呈圓形、微隆起、灰白色露滴狀，中等大小。在血瓊脂平板上長成水滴樣小菌落，無溶血現象。在血清肉湯中培養，開始輕度渾濁，4～6 h后液體變清亮，管底出現粘稠沉淀，震搖后不分散，表面形成菌環。在麥康凱瓊脂上不生長。巴氏桿菌可分解葡萄糖、果糖、蔗糖、甘露醇和半乳糖，產酸不產氣，不分解乳糖、鼠李糖、楊苷、肌醇和菊糖，產生H2S, 能形成靛基質，觸酶和氧化酶均為陽性，M.R.和V-P試驗均為陰性，石蕊牛乳無變化，不液化明膠。

（3）動物實驗?？捎貌×现瞥?：10懸液，或用已制成的分離培養菌，皮下注射小鼠、家兔或鴿，動物多在24～48小時內死亡。由于健康動物呼吸道內?？蓭Ь?，所以應參照病畜的生前臨床癥狀和剖檢變化，分離培養、生化特性作出最后診斷。

若要鑒定莢膜抗原和菌體抗原型，則要用抗血清或單克隆抗體進行血清學實驗。檢測動物血清中的抗體，可用試管凝集、間接凝集、瓊脂擴散實驗或ELISA等方法。

2.PCR診斷技術。聚合酶鏈式反應(PCR)作為一種分子生物學實驗技術，具有快速、敏感性高、特異性強、重復性好、易于標化和操作等優點，對檢測標本中病原體的核苷酸特異片段具有常規診斷方法不具備的一些優點，且應用于細菌、病毒的診斷及檢測已有較多的報道，因此用PCR技術檢測多殺性巴氏桿菌對多殺性巴氏桿菌病的診斷鑒定可取得準確的結果。

在PCR的診斷及檢測中DNA模板的質量是影響PCR檢測靈敏度的個重要因素。其中細菌DNA提取可用豬多殺性巴氏桿菌菌落，用常規SDS裂解法和常規煮沸裂解法(DNA快速抽提法)提取DNA作為PCR反應的DNA模板，且實踐證明雖然兩種方法敏感度相當，但DNA快速抽取法更簡便、節時。同一濃度的多殺性巴氏桿菌分別用這兩種方法DNA，并通過蛋白核酸測定儀測定DNA濃度，兩者差異不大。但由于SDS會抑制Taq酶活性，必須用酚一氯仿反復抽提，操作繁瑣，常導致豬多殺性巴氏桿菌DNA提取純度受到影響，而使本PCR方法不穩定。與常規煮沸裂解法比較，在豬多殺性巴氏桿菌的DNA模板處理過程，配以應用快速延伸Taq酶，可縮短PCR操作時間。

四、總結

目前對豬多殺性巴氏桿菌病的診斷常采用實驗室微生物學診斷，即病變組織的涂片染色鏡檢和病原分離，純化、生化鑒定等方法，但這些方法較繁雜、費時。聚合酶鏈式反應(polymerase chain reaction PCR)作為一種分子生物學實驗技術，具有快速、敏感性高、特異性強、重復性好、易于標化和操作等優點，對檢測標本中病原體的核苷酸特異片段具有常規診斷方法不具備的一些優點，且應用于細菌、病毒的診斷及檢測，在對豬多殺性巴氏桿菌病以及很多疾病的診斷上已有較多的報道，展示了PCR方法良好的應用前景。

打印本文   返回頂部   關閉該頁